甲型H1N1流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒

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甲型H1N1流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒

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鐵蛋白嘅提取
1）配制2%鏹水銨液，并以1mol/L嘅NaOH或者HCl調(diào)pH值，啱啱為5.85。攞1g鐵蛋白溶于100ml嘅2%硫酸銨液中。
2）加20%硫酸鎘，令zui終濃度為5%，撈勻，4℃過(guò)夜。
3）1500g離心（4℃）2h，去上清。仍加2 %鏹水銨至100ml，撈勻，離心，抹得甩不純沉渣。
4）于上清液中重新加20%硫酸鎘，重復(fù)步驟⑵，離心，去上清。
5）檢查沉渣，置顯微鏡下檢查，應(yīng)具有典型嘅黃褐色結(jié)晶，結(jié)晶為六角形，雙一四點(diǎn)結(jié)構(gòu)，如結(jié)晶唔典型，應(yīng)繼續(xù)重復(fù)以上步驟。
6）以少量嘅蒸餾水溶解，再加50%飽和鏹水銨溶液，令之沉淀，離心，去上清。
7）重復(fù)步驟⑹一次。
8）以少量蒸餾水溶解，常水透析24h后，以0.05mol/L pH7.5 PBS透析24h。
9）100000r/min離心2h，抹得甩上部?jī)由锨逡海s3/4總量），置4℃過(guò)夜。
10）用微孔濾膜（孔徑0.45μm）隔，令鐵蛋白含量為65mg/ml-75mg/ml，分裝，4℃保存唔凍做保存，以免鐵蛋白結(jié)構(gòu)遭破壞。
2.鐵蛋白－抗體交聯(lián)法
1）以0.3Mol/L pH 9.5硼酸鹽緩沖液將鐵蛋白稀釋成20mg/ml-25mg/ml。
2）以一∶1000（W/W）嘅比例加X(jué)C液室溫?cái)嚢?5min，離心去沉淀。
3）以0.3Mol/L pH 9.5硼酸鹽緩沖液將提純lgG襯成5mg/ml，以一∶4嘅比例（V/V）加IgG與鐵蛋白－XC液，4℃攪拌48h。
4）以0.1Mol/L式碳銨溶液透析過(guò)夜，以除去多余嘅異氰酸鹽，再以0.05Mol/l pH 7.5 PBS透析，令pH值恢復(fù)到生理水平。
5）超速離心以1.00×105g離心5h，去上清，沉淀以0.05Mol/L PBS懸浮，再次離心，以除去未結(jié)合嘅IgG。
6）以血清學(xué)同免疫學(xué)方法測(cè)定結(jié)合抗體嘅特異性、免疫活性與及識(shí)認(rèn)效應(yīng)，如果用步驟嚴(yán)格，結(jié)果系滿(mǎn)意嘅。
3.鐵蛋白－抗體結(jié)合物處理標(biāo)本
1）將標(biāo)本以5%福爾馬林pH 7.2（4℃）PBS液入墻40min-60min。
2）用凍嘅PBS液洗滌，離心。
3）如系組織蚊，就喺解剖顯微鏡下切更忽，放入試管中，加埋鐵蛋白－抗體結(jié)合物置室溫20min，不時(shí)振蕩，
4）以?xún)鯬BS液洗滌三次，離心。
5）沉淀以2.5%戊二醛入墻20min，以PBS洗滌。
6）再以鋨酸入墻，脫水包壅。
都可以先超薄切片，再進(jìn)行鐵蛋白－抗體結(jié)合物染色。
唔識(shí)用如下：
1）將培養(yǎng)細(xì)胞以1%福爾馬林PBS液入墻（4℃）。
2）PBS液洗滌離心。
3）以0.5ml，30%牛血清蛋白PBS液懸浮置入膠透析膜袋中，再將袋置于嗍水劑粉末上，對(duì)牛血清白蛋白成膠狀物時(shí)，將透析袋移至2%戊二醛PBS液（pH7.5）中入墻3h。
4）拎出，切忽，以PBS液洗滌。
5）置干燥器中以矽膠糠。
6）包壅、切片、喺水上有冇收集切片置于經(jīng)4%牛血清白蛋白PBS液處理嘅摟有膠膜嘅在網(wǎng)上（牛血清白蛋白嘅處理在于少鐵蛋白結(jié)合物非特異性吸附于在網(wǎng)上）。
7）滴一滴鐵蛋白－抗體結(jié)合物于在網(wǎng)上。
8）5min后，浮絲網(wǎng)于PBS液面，標(biāo)本口當(dāng)面同下，以除去多余嘅結(jié)合物。
9）凍做后，滴一滴醋酸雙氧鈾或者氫氧化鉛以復(fù)染。
10）水洗、晾干、電鏡觀(guān)察。